概述：G 蛋白偶聯(lián)受體 (GPCR) 包括了一大類完整的膜蛋白，對(duì)于跨質(zhì)膜轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞外刺激以引發(fā)分子和細(xì)胞反應(yīng)至關(guān)重要。 它們調(diào)節(jié)真核生物的各種生理過程，有超過 30% 的藥物可用靶向 GPCR。但眾所周知，膜蛋白的研究存在許多阻力，因?yàn)樗枰M膜的環(huán)境，因?yàn)?/span>一旦從細(xì)胞膜中提取，它們穩(wěn)定性便得不到保障。 在這里，我們展示了 WAVE RAPID以分辨率表征肽配體激動(dòng)劑 (NTA11) 與神經(jīng)降壓素受體 1 (NTSR1)^[1]相互作用的結(jié)合動(dòng)力學(xué)。 該神經(jīng)降壓素GPCR 介導(dǎo)多種功能，例如低血壓、高血糖、體溫過低、抗傷害感染以及調(diào)節(jié)腸道運(yùn)動(dòng)和分泌 ^[2]。

材料與方法

受體GPCR蛋白通過 avi 標(biāo)簽在體內(nèi)生物素化并被鏈霉親和素預(yù)包被的傳感器捕獲 (WAVEchip DXH-S)。檢測(cè)的肽激動(dòng)劑是一種突變和截短形式的神經(jīng)降壓素，其包含Y11A 的13個(gè)殘基 (Mw 725 Da)。 濃度為 300 nM， 3 倍稀釋7 種不同濃度的分析物。 流速設(shè)置為 30 μL/min。 運(yùn)行緩沖液為 50 mM Tris pH 7.5、150 mM NaCl 和 0.1% (w/v) 的表面活性劑月桂基麥芽糖-新戊二醇 (L-MNG)^[3] . 所有檢測(cè)均為 在 25°C 下進(jìn)行。

圖 1：分析物為神經(jīng)降壓素肽 (Mw 725 Da) ，GPCR（神經(jīng)降壓素受體NTSR1，70 kDa 蛋白質(zhì)/去污劑復(fù)合物）作為配體，上圖為配體和分析物之間相互作用的傳感圖。 數(shù)據(jù)擬合用 1:1相互作用（扣除物質(zhì)遷移效應(yīng)）模型。 

結(jié)果

生物素化并經(jīng)過純化的神經(jīng)降壓素受體被鏈霉親和素預(yù)包被的傳感器捕獲 (WAVEchip DXH-S) ，其密度為 1350 pg/mm²。 其與肽激動(dòng)劑結(jié)合的劑量反應(yīng)曲線（圖 1），得到的動(dòng)力學(xué)曲線在1:1 相互作用（物質(zhì)遷移）模型可以得到很好的擬合。表1中包含了動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)和平衡擬合數(shù)據(jù)。 

參考文獻(xiàn)

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